苏州正规无血清细胞冻存液厂家 苏州君欣生物科技供应

冻存细胞注意事项：冻存细胞系以备将来之用时，必须遵守以下原则。我们建议您严格遵守您所用细胞系附带的操作说明，以便获得较佳结果。在细胞处于生长期密度达到70-90%的情况下进行培养细胞的冻存，并且细胞传代尽可能靠前。确保冻存前活细胞百分比至少为90%。请注意较佳冻存条件取决于所用细胞系。细胞应缓慢冷冻，可使用可控制降温速度的低温冰箱或者低温冷冻容器，使温度每分钟大约降低1°C。必须使用推荐的冻存培养基。冻存培养基中应含有DMSO或者甘油等冷冻保护剂。在缓慢的冻结条件下，能使细胞内水份在冻结前透出细胞。苏州正规无血清细胞冻存液厂家

这是一款无血清即用型细胞保存液，比较大的特点就是无需程序降温盒及稀释，无需分步降温，直接使用！可在-80℃长期保存ES/iPS细胞、肿瘤细胞和常规细胞。冷冻细胞时，用1ml该细胞冻存液悬浮处于对数生长期的细胞，不需预冷，直接-80℃冷冻保存，也可用液氮快速冷冻细胞；复苏时用恒温箱或者水浴锅快速复苏细胞即可。不仅操作方便，更能提供稳定的冻存效果，获得更好的细胞活力。一款不需要放液氮罐也能长期保存的细胞冻存液试用装申请正在进行。。。苏州正规无血清细胞冻存液厂家推荐无血清冻存液特性：适合无血清培养细胞与含血清培养细胞。

使用方法：1)细胞超净台无菌环境，1.5mlEP管内加入细胞混悬剂均匀混悬细胞，细胞终浓度为5×106个/ml，混悬液体积为200μl。细胞冻存剂冰水混合物中预冷，逐滴加入细胞冻存剂800μl，细胞混悬剂与细胞冻存剂的体积比控制在1:4。2)开启程序性降温，降温速率为1℃/min，较后降温至-80℃以下进行冻存。将比较例1冻存后细胞的复苏率与实施例5冻存后细胞的复苏率进行对比，具体结果如附图1所示，可见采用本发明的冻存方法能够明显提高细胞的复苏率。其他实施例通过与比较例1进行比较，也得到相同的试验结果。本发明的冻存方法不仅可以明显提高冻存后细胞复苏率，同时还可减少不同批次细胞冻存复苏率不稳定、以及避免由血清中的支原体，细菌，朊细菌及其他细菌颗粒引发的污染。

永生化的细胞系往往相当健壮，因此，使用实验室自制的冻存培养基，效果也不错。典型的配方是在生长培养基中加入5%到10%的DMSO和5%到40%的血清，或只是在血清中加入10%的DMSO。DMSO的作用是取代细胞中的一些水，以防止冰晶形成，刺穿细胞。据赛默飞世尔科技的较深科学家RhondaNewman介绍，DMSO还能防止细胞在冷冻期间发生收缩，而后在解冻时又变得肿胀。血清，这种富含营养成分的物质，直接支持细胞。“当细胞处于这种营养丰富的环境时，它们能够更好地复苏。将要冻存的细胞悬液，进行细胞计数，计数后离心。

细胞冻存液的配制可选用10%的DMSO加上90%的小牛血清，可以现用现配。除了这个方式，还可选择20%的DMSO机上80%的小牛血清，配成两倍的储存液，在使用时细胞悬液和冻存液按照1:1的比例混匀使用，特别的方便。冻存液可直接置于-20摄氏度的环境中保存。使用细胞冻存液需要注意以下几点：1、在使用冻存液前，需要确保细胞冻存液已经完全融化，并要轻轻的混匀。对融化后的细胞冻存液要置于4℃的环境中保存。2、使用冻存液之前应该确保冻存前的细胞生长情况比较良好，比如说细胞需要处于对数生长期，并且冻存的时候存活率大于90%。3、在使用细胞冻存液期间，为了保证可以发挥较佳的效果，建议将细胞冻存在液氮之中，这样可以长时间的进行保存。如果说将细胞置于-80℃的环境下保存，那么保存的时间大约为1年。4、细胞冻存液如果需要做标记的话，要使用耐受有机溶剂的马克笔进行标记，以防被酒精或异丙醇等擦掉，不能辨识。无血清细胞冻存液的优势：无需液氮，-80℃冰箱长期冻存。苏州正规无血清细胞冻存液厂家推荐

无血清细胞冻存液存储条件：3个月以上没有使用冻存液计划时，尽可能-20℃冷冻保存。苏州正规无血清细胞冻存液厂家

细胞冻存配制含10%DMSO或甘油的细胞冻存液，4℃预冷（新鲜配制的冻存液会产生大量的热）；取对数生长期的细胞，用细胞消化酶将单层生长的细胞消化下来；悬浮细胞则直接将细胞收集到离心管中；离心1200rpm，6min；去除上清液，逐渐加入适量预冷的细胞冻存液，用吸管轻轻吹打使细胞均匀，计数，调节冻存液中的细胞终浓度为5×10e6/ml~1×10e7/ml；将细胞分装入冻存管中，每管1~1.5ml；在冻存管上标明细胞的名称、冻存时间及操作人员姓名；冻存：标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min；到达-80℃时，则可迅速放入液氮中。苏州正规无血清细胞冻存液厂家